材料和方法

材料

所有培養基成分均從Sigma-Aldrich化學公司購買，但由Fluka Biochemika（瑞士Buchs）經銷的酵母提取物除外，且所有溶劑均為HPLC級，並從Burdick和Jackson（密歇根州Muskegon）處購買。

槐脂合成

在假絲酵母生長培養基（CGM）中製備假絲酵母ATCC 22214接種物，該培養基由以下物質組成（g/l）：葡萄糖，100；酵母抽提物，10；和尿素，1，根據先前公布的方法（Ashby等人，2005年）。在2.5升台式發酵罐（Bioflo III間歇式/連續式生物反應器，新澤西州新不倫瑞克）中，在2升培養基中進行槐脂合成。基本SL生產培養基（CGM培養基）由上述相同成分和相同比例組成。用濃鹽酸將pH值調至6.0，並通過高壓滅菌對CGM培養基進行滅菌。滅菌後，將溫度平衡至26℃，並將棕櫚酸、硬脂酸、油酸或亞油酸作為脂質共基質以2%（w/v）的比例添加到培養基中，使每個培養基在接種前的最終pH值為5.8±0.2。添加棕櫚酸和硬脂酸作為不溶性固體，而添加油酸和亞油酸作為不混溶液體。將50 ml冷凍接種培養物解凍並用於接種每次發酵。生長/生產條件如下：溫度=26-C，攪拌（葉輪轉速）=700 rpm，空氣流量=2 l空氣/分鍾，無pH控製。2天後，向發酵液中添加額外的5%（w/v）幹葡萄糖和2%（w/v）脂肪酸，當添加額外的0.5%（w/v）脂肪酸時，允許發酵持續5天。然後繼續發酵2天（發酵的總持續時間為7天）。

槐脂的分離純化

為了分離SLs，將整個培養物（細胞和肉湯）分成等份，並凍幹（*2天）。將幹燥的殘留物放入1 l錐形燒瓶中，通過在250 rpm、30-C下搖晃2天，用過量的乙酸乙酯提取每部分。在整個提取過程中，定期移除50 ml乙酸乙酯，並通過TLC測試內酯相對於開鏈形式的優先溶解度的可能性（過程見下文）。提取物通過Whatman 2號濾紙過濾，剩餘固體用乙酸乙酯洗滌兩次（每次500 ml），以最大限度地提高回收率。通過蒸發濃縮含有SLs的合並乙酸乙酯餾分，並將其添加到1 l己烷中以沉澱純SLs。通過過濾從己烷中回收純SLs，並在幹燥器中真空幹燥以獲得細白色粉末，然後精確稱量以獲得產品產率。

槐脂分析

使用矽膠板（250 lm層厚，17 lm粒徑，60 A˚孔徑（Sigma-Aldrich）和氯仿/甲醇/水（80:20:1，體積比為溶劑）通過薄層色譜法闡明SL在乙酸乙酯中的優先溶解度和分餾。顯影劑為乙醇中的5%（w/v）磷鉬酸，然後炭化。

如前所述測定SL含量（Nun〜ez等人，2001）。簡言之，SL混合物通過HPLC使用Waters 2690分離模塊（Waters公司）使用15 cm 9 2.1 mm對稱C18 3.5 lm柱進行分離。使用線性梯度洗脫法從水/乙腈（0.5%甲酸）/乙腈（50:10:40，體積比）中進行洗脫並在25分鍾內將其與乙腈（0.5%甲酸）/乙腈（10:90，體積比）保持5分鍾，總運行時間為35分鍾。流速為0.25 ml/min。將流出物連接到帶有APCI探針的微型質量ZMD質譜儀（水）設置為正模式，每次掃描2秒，從m/z 200掃描到m/z 1000。電暈針電壓調整為3.8 kV，樣品錐20 V，提取錐2 V，用於檢測碎片和分子離子（[m]+）。

表麵活性測定

在滴體積Kru–ss DVT30張力計（Kru–ss USA，北卡羅來納州夏洛特）上測量油水界麵張力（IFT）。水相含有200mg表麵活性劑/l，0.01M Na2SO4，0.77mm CaCl2，0.26mm MgCl2，pH值8.0。油菜（菜籽）油用作油相。在10微升油/分鍾時記錄三次測量的平均值。使用Kibron Delta-8張力計（Kibron Inc.，芬蘭赫爾辛基）測定臨界膠束濃度（CMC）和最小表麵張力（min.ST）。樣品溶液含有0.01 mNa2SO4、0.77 mM CaCl2、0.26 mM MgCl2和各種濃度的表麵活性劑，pH值為8.0。所有物理性質測量均在室溫下進行。

槐糖脂的屬性：脂肪酸底物和混合比例的影響——摘要、介紹

槐糖脂的屬性：脂肪酸底物和混合比例的影響——材料和方法

槐糖脂的屬性：脂肪酸底物和混合比例的影響——結果與討論

槐糖脂的屬性：脂肪酸底物和混合比例的影響——結論、致謝！